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    小鼠肝細胞培養實驗

    發布時間: 2023-01-05  點擊次數: 550次

    原理

    直接從生物體內獲取組織細胞進行的首-次培養稱為原代細胞培養。原代培養是建立各種細胞系的第一步,是從事培養工作的人員應熟悉和掌握的最基本的技術。根據培養方法不同分為組織塊培養法和單層細胞培養法。

    材料與儀器

    小鼠
    DMEM DMEM 胰酶 PBS
    飯盒 紗布 小剪子 小鑷子 大鑷子 大燒杯 平皿 研磨玻片 濾網 離心管 6 孔培養板 吸管 移液管 手套 微量加樣器

    步驟

    一、實驗步驟

    1. 將小鼠斷頸致死,置 75%酒精泡2-3 秒鐘,取肝臟,置于盛有 PBS 的平皿中。
     
    2. 剔除脂肪、結締組織、血液等雜物,轉移到另一個盛有 PBS 液的平皿中。
     
    3. 用手術剪將臟器剪成小塊(大小約 1mm2),玻片研磨,轉到離心管,離心(1000 rpm,5 min)。
     
    4. 視組織或細胞量加額加入5-6 倍(3-5  ml)胰酶,37℃中消化 20 分鐘,每隔 5 分鐘振蕩一次,或用吸 管吹打一次,使細胞分離。
     
    5. 加入3-5 ml 含血清的培養液以中止胰酶消化作用。
     
    6. 用100 目孔徑濾網濾過,除去未消化的大組織塊。
     
    7. 再次離心5 min,棄上清液。
     
    8. 加入無血清培養液5 ml,沖散細胞,再離心一次,棄上清液。
     
    9. 加入含血清的培養液 1-2 ml (視細胞量),血球計數板計數。
     
    10. 將細胞調整到5x105/ml 左右,轉移至6 孔培養板中,37℃下培養。
     

    注意事項

    1. 自取材開始,保持所有組織細胞處于無菌條件。細胞計數可在有菌環境中進行。

     

    2. 在超凈臺中,組織細胞、培養液等不能暴露過久,以免溶液蒸發。

     

    3. 凡在超凈臺外操作的步驟,各器皿需用蓋子或橡皮塞蓋住,以防止細菌落入。

     

    4. 操作前要洗手,進入超凈工作臺后要用75%酒精或0.2%新潔爾滅擦拭手。試劑瓶口也要擦拭。

     

    5. 點燃酒精燈,操作在火焰附近進行,耐熱物品要經常在火焰上燒灼。金屬器械燒灼時間不能太長,以免退火,且冷卻后才能夾取組織。吸取過營養液的用具不能再燒灼,以免燒焦形成碳膜。

     

    6. 操作動作要準確敏捷,但又不能太快,以防空氣流動,增加污染機會。

     

    7. 不能用手觸及消毒器皿的工作部分,工作臺面上的用品擺放要布局合理。

     

    8. 瓶子開口后要盡量保持45°斜位。

     

    9. 吸溶液的吸管等不能混用。


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