銷售熱線

19126518388
  • 技術文章ARTICLE

    您當前的位置:首頁 > 技術文章 > 神經膠質細胞培養實驗

    神經膠質細胞培養實驗

    發布時間: 2023-01-05  點擊次數: 751次

    材料與儀器

    大鼠
    CMF-Hanks液 胰蛋白酶 DMEM F12
    水浴鍋 培養箱

    步驟

    一、原代培養

    1.  選用生后1周的新生大白鼠,用碘酒,酒精棉球消毒,斷頭取其大腦皮層組織。
     
    2.  解剖顯微鏡下,剝離腦膜,切除大腦髓質部分。
     
    3.  將大腦皮質在無Ca2+、Mg2+Hanks液(CMF-Hanks液)中剪碎。
     
    4.  室溫下靜置10 min。
     
    5.  在37℃水浴箱中用0.125%的胰蛋白酶(用CMF-Hanks液配制)消化30 min。
     
    6.  加入少許含20%血清的DMEM/F12(DMEM與F12為1:1)混合培養液(下同),用吸管稍加吹打至胰酶液與培養液混勻。離心5 min(1 000 r/min)。
     
    7.  吸去上清含酶液,重新加入含血清培養液,用吸管反復吹打至組織塊消散為止。制成細胞懸液(暫稱初細胞懸液)。
     
    8.  將初細胞懸液接種到玻璃瓶(或培養皿)中,于37℃、5%CO2培養箱中孵育30 min。
     
    9.  翻轉培養瓶,吸出瓶中的細胞懸液。用孔徑為75μm的不銹鋼網過濾。
     
    10.  將濾過液離心10 min(1 000 r/min),濃縮成約3ml的細胞懸液(暫稱為次細胞懸液)。
     
    11.  將次細胞懸液種植到預先涂布有多聚賴氨酸的培養瓶中。接種的細胞密度約1×104個/cm2。
     
    12.  置CO2培養箱中培養3-5h,再補加足夠的培養液,繼續培養9-14 h。培養液顏色略微變黃時換液。

    二、原代培養物的傳代
     
    1.  吸取舊培養液用CMF-Hanks液洗滌2次。
     
    2.加入少許0.125%的胰蛋白液消化15 min。以有血清培養液終止胰酶活性。
     
    3.稍事手動搖晃,倒掉含酶液。加入有血清培養液。
     
    4.用吸管反復吹打使細胞從培養瓶壁脫落。收集細胞懸液,離心10 min(1 000 r/min)。棄上清液,給細胞沉淀物再加入培養液制成細胞懸液。
     
    5.重復原代培養時8-10步。
     
    6.將細胞懸液按0.5×105個/cm2的密度種植在經鼠尾膠原包被的培養瓶中。
     
    7.送入CO2培養箱中培養3-5 h,再加足夠的培養液,繼續培養。

    三、結果

    分離的大鼠大腦皮質細胞在原代培養4 h后,部分細胞即可長出細小胞突。培養3-4 d之后,細胞數量便明顯增大。大鼠大腦皮質細胞原代培養一般在9-14 d,以星形膠質細胞為主的細胞即可長滿培養瓶壁。


    以上就是本期的內容,更多資訊,歡迎點擊安培生物網站鏈接了解更多技術與產品資訊。


    安培生物科技有限公司介紹:

    安培生物堅持為生命科學研究、活體動物轉染、大規模生物生產、基因和細胞治療領域客戶,提供*細胞體內可代謝的核酸轉染試劑;inviCELL™Platelet lysate無動物血清產品旨在支持廣泛的細胞擴增和生產,包括培養間充質干細胞和多種免疫細胞系等,為制藥公司或者生物技術公司提供無血清細胞培養規模生產服務;提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細胞培養可分解3D基質膠產品;提供內毒素≦ 1.0 EU/mL、對細胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產品。安培生物專注為生物醫藥領域提供優質的產品和技術服務,努力發展為基因治療、細胞治療的生物科技企業。


產品中心 Products
欧美老妇人与禽交|久久不见久久见WWW日本|暗网国产you女在线观看|国产精品人人做人人爽|日本公妇在线观看中文版