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    細胞復蘇的小細節操作讓您的細胞嗨起來

    發布時間: 2023-01-10  點擊次數: 587次

    假期太快結束,又到了復蘇細胞開始實驗的環節了 ,以下是整理的一些復蘇細胞的注意事項:

    1. 細胞儲存在液氮中,溫度達-196℃,理論上儲存時間是無限的。只要一直在液氮,凍存沒有問題,那么復蘇也不會出現很大的問題,不存在有效期限,而且可能發生的是,細胞保存的時間越久,可能代次越靠前哦,細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍快融,復蘇一定越快越好,實驗證明這樣可以最大限度的保存細胞活力。

    2. 取細胞時應做好防護措施,帶好防凍手套,護目鏡。細胞凍存管可能漏入液氮,解凍時凍存管中的氣溫急劇上升,可導致爆炸。

    3. 必須在1-2min內使凍存液完-全融化,復蘇溫度太慢,會造成細胞的損傷。如果凍存管的壁較厚,隔熱效果較好,可以適當提高水浴溫度(37℃~40℃)。凍存液建議選用進口產品,如原代細胞凍存液復蘇時細胞成活率高,DMSO含量為5%,并添加海藻糖和丙二醇以及細胞生長因子,細胞成活更高.

    4. 提前預定超凈臺,減少復蘇后插在冰盒里等待的時間。復蘇后若需要長時間(>1h)等待,建議往離心管加15ml以上培養基搖勻以稀釋DMSO給細胞帶來的毒性作用。對于不離心直接加入培養基培養的方法,培養基的加入量是個需要考慮的問題。主要涉及DMSO的濃度,一般DMSO含量為5%的細胞,在7.5ml的完-全培養基里不受影響,細胞可正常生長(這招很管用哦)。

    5. 關于細胞溶解后,是否需要離心的問題,需要根據特定的細胞情況而定。主要有兩種方式。一種是解凍后的細胞懸液直接吹打均勻后分裝到培養瓶中進行培養,第二天換液(后貼壁后即換液)。因為離心的目的是兩個,去除DMSO,去除死細胞,這個是標準流程。但對一般人來說,把握不好離心轉速和時間,轉的不夠活細胞沉底的少,細胞就全被扔掉了,轉過了活細胞會受壓過大,死亡。此外在操作過程中容易污染。另一種是須離心后,將凍存液倒干凈,且一定要倒干凈。懸浮細胞和貼壁比較慢的細胞一定要離心等特殊培養方式的細胞。

    6. 有些細胞復蘇后一星期才有起色,切忌要有耐心,不要換液,耐心等待,兩周后再做決定。不要復蘇三四天后,細胞沒有任何動靜,認為失敗,倒掉所有細胞。技術復蘇后各種花式優待它就是不長,然后大家都不想理它了,放了一周多拿出來,竟然長滿了。

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