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    細胞傷口愈合

    發布時間: 2023-01-16  點擊次數: 550次

    原理

    在單層培養細胞間制作劃痕以產生愈傷區域,然后監控該傷口周圍細胞的向劃痕遷移的現象,即傷口愈合。改變細胞遷移和/或生長的因素可以增加或降低傷口愈合率。該方法可以定量,適用于自動化系統高通量篩選。

    材料與儀器

    人MDA-MB-231細胞
    DMEM培養基 胎牛血清 PBS 戊二醛 乙醇 結晶紫
    24孔培養板 槍頭 細胞培養儀

    步驟

    1.細胞在含有10%FBS的DMEM培養基中生長。


    2.細胞以一定密度接種到24孔細胞培養板中,生長24小時后,單層細胞融合度應達到70-80%。


    3.不要更換培養基。用新的1ml槍頭輕輕的在單層培養細胞間劃痕,劃痕橫穿過孔,槍頭盡量與板孔的底部垂直,不要傾斜。這樣產生的gap的距離才與槍頭末端的外直徑相等。Gap的距離可以選用不同型號的槍頭調節。劃痕在同一方向成一條直線。


    4.在垂直與第一條劃痕的方向制作另一條劃痕,每孔劃痕成十字交叉型。


    5.劃痕后,用培養基輕輕的清洗板孔2次,以去除脫落細胞。


    6.每孔添加新鮮培養基。


    7.(培養基中含有某些成分,如抑制/促進細胞遷移和/或增殖的化學物質)


    8.細胞生長48小時(或根據時間需要)。


    9. 1xPBS清洗細胞兩次,然后使用3.7%多聚甲醛固定30分鐘。


    10. 1%的結晶紫(2%乙醇溶解)染色30分鐘。

    注意事項

    為了降低實驗結果的可變性,建議每孔選擇多個視野觀察,每組做多個重復。

    常見問題

    gap的距離可通過Photoshop或ImagJ軟件測量,為了降低實驗結果的可變性,建議每孔選擇多個視野觀察,每組做多個重復。


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