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    幾個經典的免疫細胞轉染方法分享

    發布時間: 2022-10-11  點擊次數: 1190次
       理想的免疫細胞轉染方法,應該具有轉染效率高、細胞毒性小等優點。病毒介導的轉染技術,是目前轉染效率較高的方法,同時具有細胞毒性很低的優勢。但是病毒轉染方法的準備程序復雜,常常對細胞類型有很強的選擇性,在一般實驗室中很難普及。其它物理和化學介導的轉染方法,則各有其特點。
      下面分享幾個經典的免疫細胞轉染方法:
      1.人工脂質體法
      帶正電的脂質體與核酸帶負電的磷酸基團形成復合物,進而可被細胞內吞穩定轉染/瞬時性轉染。這種方法幾乎適用于所有細胞,轉染效率高、重復型好,但轉染時需要去除血清,轉染效果隨細胞類型變化大。
      2.磷酸鈣法
      通常穿了“隱身衣”核酸分子在“照妖鏡”磷酸鈣的作用下可形成“肉眼可見”的磷酸鈣-DNA共沉淀,可使共沉淀中濃縮DNA分子與細胞表面結合并通過內吞作用進入細胞。該法可用于瞬時或穩定轉染。然而因其對pH、溫度和緩沖液鹽濃度的微小變化十分敏感,所得結果容易出現差異,且對許多類型的細胞培養物(尤其是原代細胞)具有細胞毒性,轉染效率較差。
      3.電穿孔法
      此法利用高脈沖電壓破壞細胞膜電位,使得DNA通過膜上形成的小孔導入穩定/瞬時性轉染,適用于所有類型的細胞,但細胞致死率高,DNA和細胞用量大,且需根據不同細胞類型優化電穿孔實驗條件。
      其他物理基因輸送法還包括基因槍、直接顯微注射等方式。前者又稱為粒子轟擊,可將包裹著核酸的顯微重金屬顆粒告訴射入受體細胞內,適用于瞬時性轉染。該技術需要昂貴的設備,且細胞死亡率較高。而后者則是通過精細的注射針將核酸送入胞漿中,一次只能輸送一個細胞中,適用于構建轉基因動物或輸送人工染色體。
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