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    使用zeta life轉染試劑過程應注意以下幾點

    發布時間: 2022-12-09  點擊次數: 1109次
       zeta life轉染試劑用于將DNA和siRNA轉染到真核細胞系和各種原代細胞中,可轉染極度難轉染的免疫細胞、懸浮細胞,如:T細胞、NK細胞、人淋巴細胞、THP-1等,可高效率轉染siRNA到任何哺乳動物細胞。
      使用zeta life轉染試劑過程要注意以下幾點:
      1.細胞密度:轉染質粒時,細胞密度為80-100%,轉染RNA(siRNA或miRNA)時,細胞密度為60-80%,具體細胞密度必須結合考慮核酸種類、轉染試劑種類和細胞生長密度極限。
      2.RNA用量:10-30 pmol/孔(以24孔板為例),具體用量根據轉染效率檢測實驗確定。
      3.試劑用量:轉染試劑說明書推薦了一個使用范圍,具體用量根據轉染效率檢測實驗確定。
      4.根據轉染效率檢測實驗確定核酸的用量及轉染試劑的用量(核酸與轉染試劑的比例關系),轉染效率檢測實驗一般在24孔板中進行,其他格式的培養器皿請根據底面積的比例進行計算。
      5.轉染試劑使用前才從4℃中取出,取用前,先短暫離心,然后放在渦旋振蕩器上點動混勻三次,每次持續1秒,混勻后短暫離心,上述措施是為了混勻轉染試劑,保證使用效果,使用后立即放回4℃保存。
      6.核酸和轉染試劑分別用Opti-MEM稀釋,稀釋的核酸可以通過彈勻,吹打均勻,顛倒混勻或渦旋點動混勻,稀釋的轉染試劑可以通過彈勻,顛倒混勻或渦旋點動混勻,不可使用吹打均勻;混勻后均需短暫離心。
      7.把稀釋的核酸和稀釋的轉染試劑復合混勻時,應該把稀釋的核酸加入稀釋的轉染試劑中(順序不可調轉);加入后立即進行(不要耽擱)彈勻或顛倒混勻,先不進行短暫離心,待所有的管子復合完畢后,在一起進行渦旋點動混勻三次,每次持續1秒,然后短暫離心。
      8.轉染復合物孵育形成時盡量避光室溫或37℃放置。
      9.進行RNA轉染時,盡量使用無酶及滅菌處理的耗材。
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